1. oligo的形态应该是什么样的？

答：如无特殊声明，本公司出品的寡核苷酸（oligo）均以冻干粉形式提供，因为影响结晶形态的因素较多，产品外观形态、颜色会有差异，有些无肉眼可见的形态，也为正常现象。

2. oligo如何进行稀释？

答：由于静电或气流的冲击，微小的寡核苷酸冻干粉在开盖时有可能飞出管外，因此在您稀释之前请短暂离心（3000转、1分钟即可）之后再开盖复溶。

我们会在您的合成报告单上为您提供每管引物溶解为100 uM所需的溶剂ul数，如果您需要稀释到特殊浓度，请参照以下表格进行快速计算：

答：（1）Oligo DNA干燥制品很稳定，常温下可保存数月，但最好置于-20℃保存。（2）溶解后的DNA溶液可于4℃短期保存，长期保存请置于-20℃。在溶解和使用DNA溶液时，请避免核酸酶污染，减少DNA溶液的反复冻融。（3）荧光标记Oligo DNA对光敏感，在日光下荧光强度会降低。为了保持荧光标记Oligo DNA 的荧光效率，请于-20℃避光保存。 Cy3与Cy5在溶液pH>9的条件下会发生分解，所以稀释Cy3与Cy5标记的Oligo DNA 时请注意溶液的pH值。

4. oligo可以用琼脂糖凝胶电泳染色吗？

答：不可以。EB染色主要是通过嵌入到DNA 双链的碱基之间来进行染色的。而普通合成的oligo为单链，不适合进行EB染色。如果您想要观察引物条带，请使用15%的变性PAGE胶，7M Urea*TBE Buffer，50% Formamide上样电泳，置于硅胶荧光板上，在紫外灯下观察。

5. 合成的oligo5’端是否带磷酸基团？

答：如果无特殊修饰，常规化学合成的寡核苷酸的5`及3`端均为羟基，合成短adaptor等直接用于连接时请充分考虑此点，如有必要，请选择磷酸化等基团修饰。

6. 常见的简并碱基代码是什么？

答：M=（A/C），W=（A/T），H=（A/T/C），V=（G/ A/C），D=（G/A/T），Y=（C/T），K=（G/T）， S=（G/C），B=（G/T/C），N=（A/G/C/T），R=（A/G）。

7. 长链合成的纯度大概有多少？

答：Oligo的化学合成是碱基与碱基之间通过化学反应偶联而成，而化学反应的偶联效率一般在99%左右，也就是说，在每次进行偶联反应时，都会有1%的片段附加不上新的碱基，对这种截断的失败序列，为了防止其参与后续的偶联反应，采用Cap溶液进行化学封闭，以阻断其延伸，但化学封闭反应的效率不可能达到100%。因此引物序列越长会导致其浓度越低，对于长序列引物，我们建议客户在测序时多选择几个克隆进行试验，以减少错误。

8. 如何制备双链DNA？

答：1）配制STE溶液：即10mM Tris, 1 mM EDTA, 100mM NaCl 其中，一定浓度的盐离子是比较关键的一个因素；

2）根据OD值和分子量，计算摩尔数；按1 OD = 33 ug 计

3）溶解摩尔数大的一条链至适当体积，一般50 ~100 ul；更高浓度的寡核苷酸会有助于退火完全；

4）取一定体积（与互补配对的另一条链等摩尔数）已溶解的寡核苷酸加入到互补链

5）95℃ 3分钟变性，用PCR仪或水浴加热，然后自然冷却至室温即可（最好放置于一定体积的水浴中与水同时冷却，以确保退火完全，避免降温过快）。

9. 扩增无条带需要考虑哪些方面的原因？

答：1）设计的引物与模板不匹配，引物扩增效率低

2）所用试剂包括cDNA、酶、buffer、dNTP、水等是否出现污染或降解；

3）反应体系是否需要优化；

4）选用的退火温度以及试验条件是否需要优化；

扩增无条带的原因可能有很多，如果您排除了试验的原因后，我们可以为您提供免费重合。由于考虑到引物存放等的问题，合成引物的投诉受理期限为三个月，超过三个月恕不受理。

10.出现非特异性扩增主要是什么原因？

答：1）引物设计是否恰当。

2）引物特异性差。

3）模板或引物浓度过高。

4）酶量过多。

5）Mg2+浓度偏高：DNA聚合酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感，其浓度在2.0mmol/L时该酶催化活性最高，此浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性，Mg2+过高就抑制酶活性，由于Mg2+能与dNTP结合而影响PCR反应液中游离的Mg2+浓度，因而Mgcl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整，优化浓度。一般反应中Mg2+浓度至少应比dNTP总浓度高0.5～1.0mmol/L。

6）退火温度偏低

7）循环次数过多